Makina plotësisht automatike e nxjerrjes dhe zbulimit të acidit nukleik të New Tech

Pesë forca:
● Instrumenti i konfiguruar me hapin e nxjerrjes dhe të pastrimit të acidit nukleik
● Instrumenti i konfiguruar me modul ekstraktues me ultratinguj
● Instrumenti i konfiguruar me plotësisht automatik
● Instrumenti i konfiguruar me përforcim të temperaturës së ndryshueshme
● Instrumenti i konfiguruar me komplet reagentësh të mbyllur plotësisht

1.A duhet të ekstraktohen dhe të pastrohen reagentët e zbulimit të acidit nukleik?
Parimi i zbulimit të acidit nukleik është si më poshtë: nën veprimin e primerit, ADN polimeraza përdoret për të kryer amplifikimin e reaksionit zinxhir në shabllonin e ADN/ARN-së (që kërkon transkriptimin e kundërt të NA), dhe më pas zbulohet sasia e sinjalit fluoreshent të lëshuar për të përcaktuar nëse kampioni përmban acidin nukleik (ADN/ARN) të patogjenit që do të zbulohet.

1) Mostrat që nuk janë nxjerrë ose pastruar mund të përmbajnë shumë komponentë që ndikojnë në rezultatin përfundimtar: nukleaza (e cila mund të shpërndajë acidin nukleik të synuar dhe të shkaktojë negativë të rremë), proteazë (që mund të zvogëlojë polimerazën e ADN-së dhe të shkaktojë negativë të rremë), metal të rëndë kripë (e cila çon në inaktivizimin e sintazës dhe shkakton false pozitive), PH shumë acid ose shumë alkaline (që mund të shkaktojë dështimin e reagimit), ARN jo të plotë (që çon në dështimin e transkriptimit të kundërt negativ të rremë).

2) Disa mostra janë të vështira për t'u përforcuar drejtpërdrejt: gram-pozitiv dhe disa parazitë, për shkak të mureve të tyre të trasha qelizore dhe strukturave të tjera, nëse nuk kalojnë në procesin e nxjerrjes dhe pastrimit të acidit nukleik, kompleti pa ekstraktim mund të dështojë për të. mostrat.

Prandaj, rekomandohet të zgjidhni kompletin e provës ose instrumentin e konfiguruar me hapin e nxjerrjes së acidit nukleik.

2. Nxjerrja kimike apo nxjerrja fizike e fragmentimit me ultratinguj?
Në përgjithësi, nxjerrja kimike mund të aplikohet në pjesën më të madhe të para-trajtimit dhe pastrimit.Megjithatë, në bakteret Gram-pozitive me mure të trasha dhe disa parazitë, është gjithashtu rasti që ekstraktimi kimik nuk mund të marrë shabllone efektive të acidit nukleik, duke rezultuar në zbulim të rremë negativ.Përveç kësaj, nxjerrja kimike shpesh përdor agjentë të fortë, nëse elucioni nuk është i plotë, është e lehtë të futet alkali i fortë në sistemin e reagimit, duke rezultuar në rezultate të pasakta.

Fragmentimi tejzanor përdor shtypjen fizike, e cila është përdorur me sukses nga GeneXpert, një ndërmarrje lider në fushën e POCT për përdorim njerëzor, dhe ka një avantazh absolut në nxjerrjen e acidit nukleik të disa mostrave komplekse (si Mycobacterium tuberculosis).

Prandaj, rekomandohet të zgjidhni një komplet testimi ose instrument të konfiguruar me një hap të nxjerrjes së acidit nukleik.dhe është optimale nëse ekziston një modul i nxjerrjes me ultratinguj.

3. Manual, gjysmë automatik dhe plotësisht automatik?
Ky është një problem i kostos së punës dhe efiçencës së punës.Aktualisht, spitalet e kafshëve shtëpiake pa staf të mjaftueshëm dhe nxjerrja dhe zbulimi i acidit nukleik është një punë që kërkon aftësi dhe përvojë të caktuar.Nuk ka dyshim se makina plotësisht automatike e nxjerrjes dhe zbulimit të acidit nukleik është zgjidhja perfekte.

4. Përforcim konstant i temperaturës apo amplifikim i ndryshueshëm i temperaturës?
Reaksioni i amplifikimit është një lidhje e zbulimit të acidit nukleik dhe teknologjia profesionale e përfshirë në këtë lidhje është komplekse.Përafërsisht, enzimat përdoren për të përforcuar acidin nukleik.Në procesin e amplifikimit, zbulohet sinjali i fluoreshencës i amplifikuar ose sinjali i fluoreshencës i integruar.Në përgjithësi, sa më herët të shfaqet sinjali i fluoreshencës, aq më e madhe është përmbajtja e gjenit të synuar në kampion.

Përforcimi i temperaturës konstante është një përforcim i acidit nukleik në një temperaturë fikse, ndërsa amplifikimi i temperaturës së ndryshueshme është një përforcim ciklik në mënyrë rigoroze sipas denatyrimit-pjekjes-zgjatjes.Koha e amplifikimit të temperaturës konstante është kryer, ndërsa koha e amplifikimit të temperaturës së ndryshueshme ndikohet shumë nga shkalla e rritjes dhe rënies së temperaturës së instrumentit (aktualisht, shumë prodhues kanë qenë në gjendje të bëjnë 40 cikle amplifikimi në rreth 30 minuta).

Nëse kushtet laboratorike janë të mira dhe zonimi është i rreptë, është e arsyeshme të thuhet se diferenca e saktësisë midis të dyjave nuk do të jetë e madhe.Megjithatë, përforcimi i temperaturës së ndryshueshme do të sintetizojë më shumë produkte të acidit nukleik në një kohë relativisht më të shkurtër.Për laboratorët pa zonim të rreptë dhe personel trajnimi profesional, rreziku i rrjedhjes së aerosolit të acidit nukleik do të jetë më i madh, pozitivi i rremë ndodh sapo të ndodhë rrjedhja dhe që është jashtëzakonisht e vështirë për t'u eliminuar.

Për më tepër, amplifikimi i temperaturës konstante është gjithashtu më i prirur ndaj përforcimit jospecifik kur kampioni është kompleks (temperatura relative e reagimit është më e ulët dhe sa më e lartë të jetë temperatura e zgjatjes, aq më mirë është specifika e lidhjes së primerit).

Për sa i përket teknologjisë aktuale, përforcimi i temperaturës së ndryshueshme është më i besueshëm.

5. Si të shmanget rreziku i rrjedhjes së produkteve të amplifikimit të acidit nukleik?
Aktualisht, shumë prodhues zgjedhin tubin PCR të llojit të gjëndrës si tubin e reaksionit të acidit nukleik, i cili mbyllet nga fërkimi dhe denatyrimi i temperaturës në denatyrimin e temperaturës së ndryshueshme në amplifikim PCR me temperaturë të ndryshueshme arrin 90 gradë.
Centigradë .Procesi i përsëritur i zgjerimit me nxehtësi dhe tkurrjes me të ftohtin është një sfidë e madhe për vulosjen e tubit PCR, dhe tubi PCR i llojit të gjëndrës është relativisht i lehtë për të shkaktuar rrjedhje.

Është e preferueshme që reagimi të përdoret me një çantë/tub plotësisht të mbyllur për të shmangur rrjedhjen e produktit të reagimit.Do të ishte e përkryer nëse do të mund të përpunohej një komplet plotësisht i mbyllur për nxjerrjen dhe zbulimin e acidit nukleik.

Pra, makina e re plotësisht automatike e nxjerrjes dhe zbulimit të acidit nukleik të New Tech ka pesë zgjedhjet e mësipërme optimale.